豬丹(dan)毒血(xue)清(qing)學(xue)診(zhen)斷技(ji)術(shu)

 

    （1）血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)凝(ning)集(ji)試(shi)驗  在(zai)3％胰蛋白腖肉膏(gao)湯（或(huo)肝(gan)化(hua)湯）中(zhong)，加(jia)人(ren)（1；40）壹（1：80）的(de)丹(dan)毒高免血(xue)清(qing)，同(tong)時(shi)每(mei)毫(hao)升(sheng)再(zai)加入400leg卡那黴(mei)素50／lg慶(qing)大(da)黴素及(ji)2Stag萬(wan)古黴素（缺(que)乏抗(kang)生素時(shi)，可加(jia)0．05％疊(die)氦鈉(na)及(ji)o．0005％結(jie)晶紫(zi)），制成丹毒血(xue)清(qing)抗(kang)生素診(zhen)斷(duan)液(ye)（如分裝(zhuang)安(an)瓿瓶管置(zhi)4~C冰箱(xiang)內可至(zhi)少保存2個月(yue)）。生前(qian)取病(bing)豬耳尖(jian)血(xue)1滴(di)，死(si)後(hou)則(ze)蘸(zhan)取(qu)病(bing)料少許於安(an)瓿瓶管內，37~C培(pei)養(yang)14-24h。凡(fan)管(guan)底(di)出(chu)現凝(ning)集顆(ke)粒(li)或(huo)團(tuan)塊時(shi)即(ji)判(pan)為(wei)陽(yang)性(xing)。

 

    （2）熒光抗(kang)體檢查(zha)法(fa)  用熒光素標(biao)記(ji)的豬丹(dan)毒免疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白制(zhi)成熒光抗(kang)體與(yu)病(bing)料塗(tu)片(pian)中(zhong)的(de)豬丹(dan)毒病(bing)菌發生特(te)異性(xing)結合，在(zai)熒光顯微(wei)鏡下(xia)觀察，可見(jian)亮(liang)綠(lv)色(se)菌(jun)體(ti)，即(ji)可判(pan)豬丹(dan)毒陽(yang)性(xing)，是(shi)豬丹(dan)毒快(kuai)速(su)檢疫(yi)的方法(fa)之(zhi)壹(yi)。

 

    （3）Dot-PAA-ELISA方法(fa)  肖(xiao)國(guo)生(sheng)、曹三傑(jie)、文心(xin)田(tian)等(deng)應(ying)用Dot-PAA-ELISA方法(fa)快(kuai)速(su)檢測(ce)豬丹(dan)毒抗(kang)體。以豬丹(dan)毒CD3004（1a型）和(he)C43-12（2型）菌(jun)株為(wei)抗(kang)原，EDTA滲透法(fa)提取的(de)抗(kang)原作為(wei)膜(mo)載(zai)抗(kang)原，建(jian)立了Dot-PAA-ELISA檢測(ce)豬丹(dan)毒血(xue)清(qing)抗(kang)體方法(fa)，經(jing)研究(jiu)確定了Dot-PAA-ELISA的(de)*工作條(tiao)件。試(shi)驗制(zhi)備的(de)診斷膜(mo)片(pian)特(te)異性(xing)強，不與(yu)豬瘟(wen)、豬偽(wei)狂犬(quan)病(bing)、豬肺(fei)疫(yi)、豬鏈(lian)球(qiu)菌(jun)病(bing)、豬大(da)腸(chang)桿(gan)菌病(bing)、仔豬副(fu)傷(shang)寒、豬布氏(shi)桿(gan)菌病(bing)、豬衣(yi)原體病(bing)的陽(yang)性(xing)血(xue)清(qing)發生交(jiao)叉(cha)反應(ying)；靈(ling)敏(min)度高，能(neng)夠(gou)zui低(di)檢出(chu)豬血(xue)清(qing)中(zhong)含(han)2161X10^-9g的(de)豬IgG抗(kang)體；膜片(pian)保存期長(chang)，在(zai)室溫(wen)可保(bao)存(cun)4個月(yue)，4℃可保(bao)存(cun)7個月(yue)其檢測(ce)活(huo)性(xing)不變(bian)。用該方法(fa)檢測(ce)了(le)仔(zai)豬免疫(yi)後(hou)抗(kang)體變(bian)化(hua)，並(bing)通(tong)過(guo)豬丹(dan)毒三(san)型混(hun)合強毒攻(gong)毒試(shi)驗確定了豬能(neng)抗(kang)強毒攻(gong)擊的抗(kang)體臨界(jie)保(bao)護值(zhi)為(wei)1：32。對336份血(xue)清(qing)進(jin)行(xing)豬丹(dan)毒抗(kang)體檢測(ce)，陽(yang)性(xing)檢出(chu)率(lv)為(wei)96．13％。試(shi)驗結(jie)果表明，本(ben)試(shi)驗方法(fa)操(cao)作簡(jian)便(bian)、快速(su)準(zhun)確、結(jie)果可存(cun)檔、重(zhong)復性(xing)和(he)穩(wen)定性(xing)好，所(suo)用試(shi)劑材(cai)料(liao)均可做(zuo)到(dao)標(biao)準(zhun)化(hua)，適合基層檢疫(yi)單(dan)位和(he)養(yang)豬企業(ye)用於豬群(qun)免疫(yi)監測(ce)和(he)豬丹(dan)毒流行病(bing)學(xue)調查(zha)。