豬(zhu)丹毒(du)分子生(sheng)物學診(zhen)斷技(ji)術

 

    常(chang)規(gui)細(xi)菌(jun)培養(yang)檢(jian)測豬(zhu)丹(dan)毒(du)至少要3天(tian)，鑒(jian)定血清型(xing)大(da)約要lo天(tian)，而(er)這(zhe)種PCR法(fa)可在5h內完成(cheng)。它(ta)使(shi)用(yong)兩步擴(kuo)增法(fa)，先(xian)用(yong)高度特(te)異性(xing)引物組M0101-M0102進(jin)行初步(bu)擴(kuo)增之(zhi)後，再添加4種特異性(xing)寡(gua)核(he)苷酸(suan)引物組對(dui)4種(zhong)不同血清型(xing)豬丹(dan)毒的16SrRNA序列(lie)進(jin)行擴(kuo)增。

 

    rRNA基(ji)因簇(cu)包(bao)括(kuo)16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下(xia)遊非(fei)編碼區。對該簇(cu)編碼的DNA序列(lie)進(jin)行測定(ding)，以設計種(zhong)特異性(xing)PCR檢(jian)測系(xi)統(tong)的引物。豬紅(hong)斑丹毒(du)絲(si)菌2型(xing)、3型(xing)、18型(xing)及扁(bian)桃體(ti)丹(dan)毒絲菌血清?型(xing)的rRNA基(ji)因的DNA序列(lie)的同源(yuan)性(xing)在96．0％壹98．4％。

 

    以前(qian)DNA探針(zhen)雜交法和常(chang)規(gui)PCR都(dou)不(bu)能(neng)區分豬丹毒(du)屬(shu)這(zhe)4種(zhong)血清型(xing)，而這(zhe)種PCR擴(kuo)增法(fa)是(shi)特(te)異的，能逐(zhu)壹區別(bie)鑒(jian)定，而且它(ta)可以從(cong)患病動物的組織(zhi)樣品(pin)中直(zhi)接進(jin)行PCR試驗(yan)並得(de)出結果(guo)。整個(ge)試驗(yan)不(bu)超過5h，這(zhe)種(zhong)對編碼rRNA基(ji)因簇(cu)的DNA序列(lie)的特異性(xing)系統(tong)PCR擴(kuo)增法(fa)十(shi)分，易(yi)讀(du)顯示結果(guo)，可快速(su)診(zhen)斷屠宰(zai)場豬丹(dan)毒(du)菌(jun)感(gan)染豬。