酶聯(lian)法(fa)檢測(ce)血(xue)吸(xi)蟲抗(kang)體

    [方(fang)法學(xue)原理]  將血(xue)吸(xi)蟲可溶(rong)性(xing)抗原與固相載(zai)體聯(lian)結(jie)形成(cheng)固相抗原，加待檢血(xue)清(qing)，如血(xue)清(qing)中(zhong)有特(te)異性(xing)抗體則與固相抗原相結(jie)合(he)，形成(cheng)固相抗原抗體復(fu)合(he)物(wu)；再加HRP標羊(yang)抗(kang)人(ren)IgG抗(kang)體，形成(cheng)固相抗原—抗體—羊(yang)抗(kang)人(ren)IgG酶(mei)標(biao)記抗體復(fu)合(he)物(wu)，在此基(ji)礎上加酶底(di)物(wu)顯(xian)色，顏(yan)色(se)深(shen)度與抗體含量成(cheng)正(zheng)比。

    [標本準(zhun)備(bei)]  不(bu)抗凝靜脈血(xue)2ml

    [試(shi)劑(ji)]

    1．日(ri)本(ben)分體血(xue)吸(xi)蟲可溶(rong)性(xing)抗原

    2．HRP標記(ji)羊(yang)抗(kang)人(ren)IgG

    3．0．05mmol／LpH9．6碳(tan)酸(suan)鹽緩沖液

    4．稀釋(shi)液和(he)洗滌(di)液

    5．酶(mei)底(di)物(wu)液

    6．2mol／LH2504溶(rong)液

    7．正(zheng)常(chang)人(ren)（陰(yin)性(xing)對照(zhao)）血(xue)清(qing)

    [檢測(ce)步(bu)驟]

    1．日(ri)本(ben)血(xue)吸(xi)蟲可溶(rong)性(xing)蟲卵抗原用pH9．6碳(tan)酸(suan)鹽緩沖液作(zuo)1：3 000稀釋(shi)，包被(bei)反(fan)應(ying)板，每孑(jie)岫口lOOtA，置4℃環(huan)境中過夜。

    2．用前洗滌(di)包被(bei)板(ban)3min× 3，加被檢血(xue)清(qing)，每(mei)份標本做3孔，每孔lOOgl，另加正常(chang)人(ren)（陰(yin)性(xing)對照(zhao)）血(xue)清(qing)2孔。37C環(huan)境中保溫2h，洗滌(di)3minX3。

    3．加HRP-抗人(ren)IgG，每(mei)孔100gl，37℃環(huan)境中放置2h，洗滌(di)3rainX3。

    4．加酶底(di)物(wu)液每(mei)孔100~1，於(yu)室(shi)溫環(huan)境中避光(guang)保存30min，各孔加2mol／L H₂S0₄ 1滴終止(zhi)反(fan)應(ying)，用酶標比(bi)色(se)儀490nm測各孔A值。

    [參(can)考範(fan)圍]  血(xue)吸(xi)蟲抗(kang)體陰(yin)性(xing)

    [註意事項(xiang)]

    1．待檢血(xue)清(qing)應(ying)新鮮或(huo)冰凍保存，不能汙(wu)染(ran)。

    2．在實驗(yan)室的(de)全部洗(xi)滌(di)過程中，清(qing)洗(xi)要(yao)*，以(yi)除去(qu)末(mo)參與(yu)反(fan)應(ying)的(de)所有(you)物(wu)質(zhi)。

    3．試(shi)劑(ji)盒(he)應(ying)保存於(yu)4壹(yi)-20C冰箱中(zhong)，用(yong)前取(qu)出(chu)，待試(shi)劑(ji)恢(hui)復(fu)至(zhi)室(shi)溫後(hou)使(shi)用。

    [臨(lin)床意義(yi)]  糞便(bian)中(zhong)蟲卵陽性(xing)者血(xue)清(qing)中(zhong)抗體檢出(chu)率(lv)為(wei)97％以(yi)上，正常人有2％～3％假陽性(xing)。不同(tong)種屬(shu)寄生蟲無明(ming)顯(xian)交叉(cha)反(fan)應(ying)。1979年，Tamaka應用(yong)ELISA間(jian)接法測日(ri)本(ben)分體血(xue)吸(xi)蟲患者(zhe)抗(kang)體陽性(xing)率為(wei)100％。本(ben)法(fa)具有高(gao)度的(de)敏感(gan)性(xing)，但有(you)1％壹2．3％假陽性(xing)，對同(tong)種屬(shu)曼氏和(he)埃及(ji)血(xue)吸(xi)蟲有(you)交叉(cha)反(fan)應(ying)。