間接(jie)熒(ying)光抗體(ti)染色(se)法(fa)檢測(ce)瘧(nue)疾

    [檢測(ce)方法] 

    [方法學(xue)原(yuan)理]  抗原片上加(jia)患(huan)者血(xue)清，若血(xue)清中含(han)有瘧(nue)原蟲抗體(ti)，即(ji)可與抗原結(jie)合(he)成(cheng)相應(ying)的(de)抗原抗體(ti)復合(he)物，此復合(he)物再與熒(ying)光標(biao)記抗人IgG抗體(ti)結(jie)合(he)，zui後通(tong)過(guo)熒(ying)光顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)熒(ying)光反應。

    [試(shi)劑]

    1．0．01mol／LpH7．6 PBS

    2．熒(ying)光標(biao)記抗人IgG抗體(ti)

    3．陰性(xing)對(dui)照、陽性(xing)對(dui)照血(xue)清

    4．抗原片

    [檢測(ce)步驟(zhou)]

    1．用(yong)鉛筆(bi)將(jiang)抗原片（厚血(xue)膜(mo)）劃成(cheng)12個(ge)小(xiao)格(ge)，放置(zhi)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)中浸(jin)泡(pao)2～3min，以(yi)脫(tuo)去(qu)血(xue)紅蛋(dan)白，吹幹(gan)。

    2．用(yong)無水(shui)乙醇(chun)固(gu)定(ding)10min，吹幹(gan)。

    3．將(jiang)被(bei)檢血(xue)清用(yong)PBS從(cong)1：10開始作倍比稀釋(shi)，將(jiang)此(ci)稀釋(shi)血(xue)清分別加在(zai)小(xiao)格(ge)中，每(mei)格1小(xiao)滴(di)，同(tong)時設(she)陽性(xing)對(dui)照和陰性(xing)對(dui)照。

    4．將(jiang)抗原片放濕(shi)盒(he)中置(zhi)37C環境中孵育30min，棄(qi)去殘(can)余血(xue)清，用(yong)PBS洗3次，每(mei)次3min，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)漂洗壹遍以(yi)脫(tuo)鹽(yan)，吹幹(gan)。

    5．將(jiang)已(yi)稀釋(shi)的熒(ying)光標(biao)記抗人IgG抗體(ti)加於各小(xiao)格(ge)中心(xin)，每(mei)格1小(xiao)滴(di)，同(tong)上孵育，漂洗吹幹(gan)，熒(ying)光顯(xian)微鏡(jing)檢。

    [結(jie)果判斷]  陽(yang)性(xing)結(jie)果小(xiao)格(ge)內有與原蟲胞漿結(jie)構(gou)相似(si)的明(ming)亮熒(ying)光；陰性(xing)結(jie)果原蟲胞漿結(jie)構(gou)模(mo)糊(hu)無熒(ying)光。陰陽性(xing)對(dui)照結(jie)果無誤，實(shi)驗成(cheng)立。

    [正常參(can)考(kao)值]  正(zheng)常人(ren)抗體(ti)效(xiao)價(jia)≤1：10，但瘧(nue)疾流(liu)行(xing)區(qu)的(de)正(zheng)常人(ren)（成(cheng)人(ren)）抗體(ti)效(xiao)價(jia)稍高。

    [註意事(shi)項(xiang)]

    1．具(ju)有較(jiao)多裂殖體(ti)的血(xue)片，陽性(xing)檢出率(lv)高(gao)，因(yin)為瘧(nue)原蟲的裂(lie)殖體(ti)的抗原性(xing)zui強(qiang)。

    2．采(cai)用(yong)厚(hou)血(xue)膜(mo)做抗原片時，經(jing)溶血(xue)後瘧(nue)原蟲容(rong)易(yi)變(bian)形，故觀察(cha)結(jie)果時要認真(zhen)辨認(ren)（必(bi)要時可(ke)做瑞氏染色(se)對(dui)照(zhao)）以(yi)排(pai)除非特(te)異性(xing)熒(ying)光。

    3．加(jia)被(bei)檢血(xue)清時，要防(fang)止互相串(chuan)格。

    [臨床(chuang)意義(yi)]  被(bei)檢血(xue)清≥1：20陽性(xing)，表明(ming)瘧(nue)原蟲感染。流(liu)行(xing)區(qu)人(ren)們(men)抗體(ti)陽性(xing)檢出率(lv)較(jiao)高。有學者報道患(huan)者抗體(ti)陽性(xing)率(lv)為55．1％，明(ming)顯高於血(xue)膜(mo)染色(se)檢查法(fa)（陽性(xing)率(lv)28．1％）。間日瘧(nue)患(huan)者經*後熒(ying)光抗體(ti)的陽(yang)性(xing)率(lv)迅(xun)速下(xia)降。值得(de)註(zhu)意(yi)的(de)是，已(yi)*10余(yu)年(nian)的人群(qun)中尚(shang)有8％的人(ren)存在(zai)低滴度抗體(ti)水(shui)平。由(you)此可(ke)見，本試(shi)驗結(jie)果陽性(xing)的(de)意義不在(zai)於診(zhen)斷，而(er)在(zai)於流行(xing)病學調(tiao)查。