利用(yong)抗原柱純化(hua)抗體的(de)常(chang)見(jian)問(wen)題(ti)

 

    免疫親和(he)純化(hua)技(ji)術(shu)常用於下(xia)面兩(liang)種(zhong)情況。*種(zhong)情況是(shi)抗肽抗體的(de)制(zhi)備。在(zai)制(zhi)備抗肽抗體的(de)過程(cheng)中(zhong)，要將(jiang)抗肽抗體所針對的(de)合成肽結合到(dao)載(zai)體蛋白上(shang)，以產(chan)生(sheng)有效(xiao)的(de)免疫原性(xing)。針對肽—載(zai)體復合物(wu)的(de)多(duo)克(ke)隆(long)抗體產生(sheng)後，通(tong)常並(bing)不(bu)能直接使用(yong)，而(er)要從(cong)血清的(de)大(da)量混(hun)合抗體中分(fen)離出(chu)特(te)異識別(bie)該(gai)肽段(duan)的(de)抗體。免疫親和(he)純化(hua)技(ji)術(shu)能達到兩(liang)個目(mu)的(de)，壹是將所(suo)需(xu)的(de)抗體從針對載(zai)體蛋白的(de)抗體中分(fen)離出(chu)來(lai)；二(er)是濃(nong)縮特異性(xing)的(de)抗肽抗體，提(ti)高(gao)其(qi)相(xiang)對濃度(du)。

 

    免疫親和(he)純化(hua)抗體技(ji)術(shu)應用的(de)第(di)二(er)種(zhong)情況是(shi)用(yong)於多(duo)克(ke)隆(long)抗體制(zhi)備，  目的(de)是(shi)去(qu)除不需(xu)要的(de)抗體。特異及非特(te)異的(de)背(bei)景問(wen)題(ti)通常(chang)在(zai)用(yong)多(duo)抗時更為(wei)嚴(yan)重(zhong)。去(qu)除非特(te)異抗體的(de)方(fang)法(fa)之(zhi)壹是用抗原柱純化(hua)所(suo)需抗體。這壹方法(fa)能大大減(jian)少幹(gan)擾(rao)免疫化學檢(jian)測(ce)結果的(de)非(fei)特異性(xing)抗體。雖然有點(dian)麻煩，但能將低(di)劣的(de)抗血清變為有價值(zhi)的(de)試(shi)劑(ji)。

 

    這壹方法(fa)的(de)主(zhu)要優勢(shi)是(shi)能將特異性(xing)抗體從多(duo)種(zhong)抗體的(de)混(hun)合樣本(ben)中(zhong)分(fen)離出(chu)來(lai)。它的(de)zui大(da)的(de)缺(que)點(dian)是(shi)需(xu)要大(da)量(liang)的(de)抗原，而且特異性(xing)抗體所需的(de)洗(xi)脫(tuo)條件可能導(dao)致抗體活性(xing)的(de)部(bu)分(fen)喪(sang)失。

 

    如果可(ke)用(yong)的(de)抗原量很少(shao)，用免疫親和(he)純化(hua)技(ji)術(shu)純化(hua)所(suo)需抗體就不合適(shi)。這種(zhong)情況可(ke)以(yi)考慮用免疫印(yin)跡(ji)轉(zhuan)移到硝(xiao)化(hua)纖維膜上(shang)的(de)抗原來(lai)純化(hua)抗體，雖然這壹方法(fa)純化(hua)的(de)抗體量有限，但(dan)作(zuo)為分(fen)析(xi)研(yan)究(jiu)用已足(zu)夠(gou)。

 

    如果抗體不能穩(wen)定(ding)地(di)從(cong)柱(zhu)上(shang)洗(xi)脫(tuo)，或(huo)洗(xi)脫(tuo)下來(lai)的(de)抗體不再(zai)結合抗原，應試(shi)用(yong)其(qi)他(ta)的(de)洗(xi)脫(tuo)條件。第(di)九章(zhang)詳細討(tao)論了(le)免疫親和(he)純化(hua)技(ji)術(shu)，這種(zhong)方法(fa)可用於(yu)分(fen)離抗原。這兩(liang)種(zhong)親和(he)純化(hua)技(ji)術(shu)的(de)原理(li)是(shi)壹樣的(de)，第(di)九章(zhang)介紹的(de)洗(xi)脫(tuo)條件在(zai)這裏(li)也可(ke)以試(shi)用(yong)。

 

    有時少量的(de)抗原能從抗原柱上(shang)洗(xi)脫(tuo)。如果在(zai)某些檢(jian)測(ce)中(zhong)，那(na)些用親(qin)和(he)純化(hua)獲(huo)取(qu)的(de)抗體對抗原的(de)汙(wu)染敏(min)感(gan)（如涉及酶活性(xing)的(de)檢(jian)測(ce)），就必須(xu)檢(jian)測(ce)每(mei)壹份抗體洗(xi)脫(tuo)液中(zhong)是(shi)否有抗原存在(zai)。