DNA限制酶(mei)分(fen)析與(yu)切(qie)割

 

    a. 請隨時(shi)保(bao)持實(shi)驗(yan)桌(zhuo)的清潔。

    b. 微(wei)?移液器頭(tou)及微(wei)?離(li)心管(guan)取出後?即(ji)將(jiang)蓋(gai)子(zi)蓋(gai)上(shang)。

    c. 請勿(wu)用(yong)手觸(chu)摸滅過(guo)菌的微(wei)?移液器頭(tou)、微(wei)?離(li)心管(guan)及各(ge)種(zhong)容(rong)器(qi)的內部(bu)。

    d. 溶(rong)液打(da)開(kai)後(hou)，蓋(gai)子(zi)請勿(wu)隨意(yi)置放(fang)。吸(xi)取各(ge)種(zhong)溶(rong)液請使用(yong)滅過(guo)菌(jun)的微(wei)?移液器頭(tou)；Pipetman 要(yao)保(bao)持垂直，?要(yao)碰(peng)到容(rong)器(qi)壁(bi)；每次吸(xi)出溶(rong)液後，請?即(ji)將(jiang)蓋(gai)子(zi)蓋(gai)上(shang)。

 

    儀(yi)器(qi)用(yong)具：

    37℃及65℃水(shui)浴(yu)或(huo)恒(heng)溫槽(cao)

 

    藥品(pin)試(shi)劑(ji)：

    質體(ti)pBluescript II SK （-）

    限制酶(mei)：BamHI, PvuII 及ScaI （濃(nong)?均(jun)為10 units/μL, Invitrogen）

    10×Reaction buffer 6 （0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl）

    無(wu)菌水(shui)

 

    方(fang)法步(bu)驟(zhou)：

    1） 取7 支(zhi)微(wei)?離(li)心管(guan)，依下(xia)表所(suo)?體(ti)積(ji) （單(dan)位 μL） 依(yi)序加於(yu)管(guan)壁(bi)?同(tong)位(wei)置上(shang)。

    ◆ 每次吸(xi)取限制酶(mei)時(shi)，請換(huan)壹支(zhi)新的微(wei)?移液器頭(tou)以免(mian)造成(cheng)汙染。

    總體(ti)積(ji)為20 μL，短暫(zan)離(li)心後，以微(wei)?移液器頭(tou)輕輕混合，#1 置冰浴中，其余各(ge)管(guan)置於37℃反(fan)應(ying)1 h。

    2） 置65℃水(shui)浴(yu)15 min 中(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)後，移置冰浴?卻，即(ji)可進(jin)?電(dian)泳(yong)分(fen)析。