肝(gan)素(su)-相關自身抗原(yuan)

 

    肝(gan)素(su)是壹(yi)種天然(ran)產(chan)生(sheng)的(de)氨(an)基葡聚(ju)糖，是(shi)由(you)肝(gan)素(su)蛋白轉(zhuan)錄後(hou)糖基化修飾(shi)而(er)形成。肝(gan)素(su)的(de)非硫(liu)酸(suan)化前(qian)體主(zhu)要(yao)由(you)D-葡(pu)萄(tao)糖醛(quan)酸(suan)和(he)N-乙酰(xian)半乳糖胺(an)殘(can)基交(jiao)替(ti)構(gou)成，經過(guo)N端去(qu)乙酰(xian)化、N端硫(liu)酸化、差向(xiang)異構(gou)化和O端硫(liu)酸化後形成活(huo)性(xing)多(duo)聚(ju)體。這(zhe)些(xie)結(jie)構(gou)上的(de)修飾(shi)程(cheng)度(du)不*相同(tong)，因而(er)在(zai)每(mei)條多(duo)糖鏈(lian)上形成了不同(tong)數(shu)量的(de)硫酸(suan)二(er)糖單(dan)位(wei)。具有抗凝血活(huo)性(xing)的(de)肝(gan)素(su)含(han)有壹(yi)種特(te)殊的(de)五糖序(xu)列(lie)，這(zhe)壹(yi)序列(lie)可(ke)以與絲(si)氨(an)酸(suan)、抗(kang)凝血酶(mei)Ⅲ（AT-Ⅲ）的(de)重(zhong)要(yao)結(jie)構(gou)性(xing)氨(an)基酸殘(can)基結合(he)，結(jie)合(he)後(hou)可(ke)以引(yin)起(qi)AT-Ⅲ可(ke)逆性(xing)變構(gou)，以使其對(dui)諸(zhu)如(ru)凝血酶(mei)、凝血因子(zi)FIXa和Xa等絲(si)氨(an)酸(suan)蛋白酶(mei)反(fan)應的(de)Km值降(jiang)低。肝(gan)素(su)分子(zi)通(tong)過(guo)在同(tong)壹(yi)多(duo)糖鏈(lian)上結(jie)合(he)抗(kang)凝血酶(mei)抑(yi)制物(wu)和(he)蛋白酶(mei)、形成三元復合(he)物(wu)來(lai)增(zeng)加(jia)AT-Ⅲ分子(zi)的(de)活性(xing)。商品(pin)化肝(gan)素(su)主(zhu)要(yao)由(you)牛或(huo)豬的(de)肺、腸(chang)內(nei)肝(gan)素(su)經酶(mei)解(jie)、鹽(yan)析(xi)和(he)凝膠色譜分(fen)離(li)後得到(dao)。它是(shi)壹(yi)種異源性(xing)的(de)混(hun)合(he)物(wu)，由(you)分(fen)子(zi)量為(wei)5～30kD的(de)多(duo)糖鏈(lian)（平(ping)均(jun)分(fen)子(zi)量為(wei)15kD且平(ping)均(jun)鏈(lian)長(chang)度為(wei)50個單糖殘(can)基）構(gou)成。然(ran)而(er)，在(zai)人體內(nei)只(zhi)有大(da)約(yue)1／3的(de)商品(pin)化肝(gan)素(su)樣品(pin)與AT-Ⅲ高親和性(xing)結合(he)並(bing)發揮活(huo)性(xing)。分子(zi)量為(wei)1-10kD的(de)低分子(zi)量肝(gan)素(su)（LMWH）可(ke)以通(tong)過(guo)酶(mei)解(jie)或化學(xue)解(jie)聚而(er)產(chan)生(sheng)，它(ta)可(ke)以保(bao)留抗Xa活(huo)性(xing)，但卻不能直(zhi)接抑(yi)制凝血酶(mei)。

 

    血(xue)小板因子(zi)4（PF4），是壹(yi)個由(you)70個氨(an)基酸肽(tai)組(zu)成的(de)分子(zi)（分子(zi)量為(wei)7800）；它由巨核細胞(bao)產(chan)生(sheng)後(hou)儲存(cun)於(yu)α-粒血(xue)小板中(zhong)，當血小板激活(huo)時(shi)釋放出來。除(chu)了拮抗(kang)胞(bao)質(zhi)內(nei)肝(gan)素(su)的(de)活性(xing)外，PF4是(shi)中(zhong)性(xing)粒細胞(bao)、單(dan)核細胞(bao)和(he)成纖(xian)維細胞(bao)的(de)趨化因子(zi)，在體外是(shi)血(xue)管生(sheng)成和(he)巨細胞(bao)缺乏癥的(de)壹(yi)種抑(yi)制因子(zi)。利(li)用(yong)PF4對(dui)肝(gan)素(su)的(de)高親和性(xing)，可(ke)以從體液中純(chun)化出PF4。基因重(zhong)組(zu)型PF4可(ke)以在(zai)K．coli裏表達並保(bao)留(liu)它天然(ran)蛋白的(de)生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)和抗原(yuan)特(te)性(xing)。PF4分子(zi)與肝(gan)素(su)的(de)結合(he)區(qu)主(zhu)要(yao)在(zai)其(qi)C末端（由(you)壹(yi)個。螺(luo)旋與兩個(ge)緊(jin)密連(lian)接(jie)的(de)賴氨(an)酸(suan)-賴(lai)氨(an)酸(suan)殘(can)基組(zu)成）。PF4分(fen)子(zi)還可(ke)與其他(ta)陰離(li)子(zi)性(xing)的(de)氨(an)基硫酸(suan)鹽(yan)葡聚(ju)糖結(jie)合(he)，只(zhi)是親和力要(yao)較(jiao)肝(gan)素(su)為低。而(er)肝(gan)素(su)分子(zi)上與PF4的(de)結合(he)區(qu)並(bing)不包(bao)括(kuo)與AT-Ⅲ結合(he)的(de)五糖序(xu)列(lie)，但這(zhe)壹(yi)區域(yu)包(bao)括(kuo)壹(yi)段長(chang)為6個(ge)單糖的(de)微(wei)小鏈(lian)。PF4與肝(gan)素(su)結合(he)的(de)效率可(ke)以隨著低聚糖鏈(lian)的(de)長(chang)度的(de)增加(jia)而(er)增(zeng)加(jia)。

 

    肝(gan)素(su)／PF4復合(he)物(wu)產(chan)生(sheng)的(de)HIT抗體對(dui)肝(gan)素(su)／PF4復合(he)物(wu)的(de)親和力要(yao)遠(yuan)大(da)於(yu)對(dui)每(mei)壹(yi)單個(ge)成分(fen)的(de)親和力，這(zhe)可(ke)能是(shi)由(you)於(yu)復合(he)物(wu)在(zai)形成過(guo)程(cheng)中(zhong)改(gai)變了壹(yi)個或(huo)兩個成分(fen)的(de)構(gou)象，或者(zhe)是(shi)在兩(liang)個成分(fen)的(de)交(jiao)界(jie)面形成新(xin)的(de)表位。這(zhe)種復(fu)合(he)物(wu)的(de)晶(jing)體結構(gou)如(ru)下：每壹(yi)單體由壹(yi)個伸展的(de)N-末端環(huan)插入(ru)壹(yi)個由(you)三個(ge)反(fan)向(xiang)平(ping)行(xing)束和壹(yi)個。螺(luo)旋C末端組(zu)成的(de)β-片(pian)層折(zhe)疊(die)的(de)方向(xiang)平(ping)行(xing)構(gou)象的(de)連(lian)接(jie)形成；四(si)聚體則由兩(liang)個二(er)聚(ju)體組(zu)成，具有由突出(chu)於(yu)蛋白質(zhi)分子(zi)表面的(de)γ螺旋(xuan)和(he)β-片(pian)層折(zhe)疊(die)形成的(de)“三明治(zhi)”結(jie)構(gou)。