抗體標(biao)記直(zhi)接法和(he)間接法的選用(yong)

    很(hen)多免疫(yi)學(xue)技術依賴於(yu)標(biao)記抗體的(de)使(shi)用(yong)。對(dui)抗體進(jin)行標(biao)記(ji)主(zhu)要(yao)是(shi)用(yong)於(yu)抗原的(de)定(ding)位分(fen)析，在某(mou)些情(qing)況(kuang)下，也可(ke)以(yi)對混(hun)雜(za)有大(da)量(liang)其(qi)他分(fen)子(zi)的樣本(ben)中(zhong)的(de)抗原進(jin)行定(ding)量檢(jian)測(ce)。由於(yu)抗體與(yu)其(qi)相應抗原具(ju)有(you)很高的親(qin)和(he)力(li)，因此帶有易(yi)識(shi)別標記(ji)物(wu)的(de)抗體可(ke)以(yi)定(ding)位分(fen)析抗原，並(bing)且(qie)是(shi)壹(yi)種(zhong)理想的快速價廉的定(ding)量測(ce)定(ding)方(fang)法。需(xu)要(yao)使(shi)用(yong)標(biao)記(ji)抗體的(de)三種(zhong)方(fang)法，即(ji)免疫(yi)染色法、免疫(yi)印(yin)跡法和(he)免疫(yi)分(fen)析。此三種方(fang)法均能定(ding)位復(fu)雜(za)混(hun)合(he)物(wu)中(zhong)的抗原，而(er)且(qie)通過(guo)適當的對(dui)照也(ye)能定(ding)量測(ce)定(ding)。就(jiu)免(mian)疫(yi)染色法而言，其(qi)目(mu)的就(jiu)是(shi)定(ding)位正常細(xi)胞(bao)環(huan)境中出現(xian)的(de)抗原。在(zai)此背景下，所(suo)有抗原均(jun)暴(bao)露於(yu)抗體，而(er)抗體只(zhi)和(he)相應(ying)的(de)抗原結(jie)合(he)，標記後的(de)抗體則(ze)能夠(gou)準(zhun)確定(ding)位抗原。免(mian)疫(yi)印(yin)跡法是(shi)將(jiang)復(fu)雜(za)的蛋(dan)白(bai)混(hun)合(he)物(wu)經(jing)過(guo)變(bian)性(xing)和(he)凝膠(jiao)電泳(yong)分(fen)離(li)後(hou)，轉移(yi)至膜上，然後(hou)利用(yong)標(biao)記(ji)抗體即(ji)能從壹(yi)系(xi)列蛋(dan)白(bai)區(qu)帶中檢出所(suo)要(yao)研(yan)究(jiu)的(de)抗原。免(mian)疫(yi)分(fen)析則(ze)是(shi)利用(yong)各種(zhong)方(fang)法顯(xian)示或捕(bu)獲(huo)抗原，然後(hou)用(yong)標(biao)記(ji)抗體進(jin)行定(ding)位和(he)定(ding)量分(fen)析。上述(shu)技(ji)術均(jun)依賴於(yu)標(biao)記抗體來定(ding)位抗原。

    當準備采用(yong)這(zhe)些方(fang)法時(shi)，首先應(ying)確(que)定(ding)利用(yong)直(zhi)接法還(hai)是(shi)間接法來定(ding)位抗原以(yi)及(ji)選用(yong)何(he)砷標記(ji)物(wu)該(gai)項技(ji)術的(de)要(yao)求(qiu)。下面(mian)將(jiang)討(tao)論這(zhe)兩個(ge)問(wen)題。

    檢測(ce)技術(shu)可(ke)分(fen)為兩大(da)類即(ji)直(zhi)接法和(he)間接法。直(zhi)接法是(shi)將(jiang)抗體經(jing)過(guo)純(chun)化，再(zai)用(yong)壹(yi)種(zhong)易(yi)於(yu)識(shi)別的示蹤劑標記(ji)，然後(hou)使(shi)其(qi)直(zhi)接與抗原結(jie)合(he)，通過檢測(ce)抗體上的(de)標(biao)記物(wu)來測(ce)定(ding)相應(ying)抗原。在(zai)間接法中，抗體既不用(yong)標(biao)記(ji)也(ye)無須(xu)純(chun)化，當其(qi)與抗原結(jie)合(he)後經(jing)過(guo)洗滌(di)除(chu)去(qu)未結(jie)合(he)的抗體，再(zai)通(tong)過(guo)二(er)的試劑如標記(ji)的抗免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白(bai)抗體或(huo)蛋(dan)白(bai)A、蛋(dan)白(bai)G等(deng)來檢(jian)測(ce)抗原抗體復(fu)合物(wu)。在(zai)上述(shu)過(guo)程中，與抗原結(jie)合(he)的抗體稱(cheng)為*抗體(簡(jian)稱壹(yi)抗)，當其(qi)用(yong)於(yu)直(zhi)接法時(shi)經(jing)過(guo)標記，而在間接法中則(ze)未標(biao)記；與(yu)壹(yi)抗結(jie)合(he)的抗體稱(cheng)為第(di)二抗體(簡(jian)稱二(er)抗)，在(zai)間接法中常被(bei)標(biao)記。

直(zhi)接與間接檢(jian)測(ce)法

   直(zhi)接法或間接法的選用(yong)取決(jue)於(yu)實(shi)驗條件。在(zai)直(zhi)接檢測(ce)法中應用(yong)標(biao)記(ji)的(de)壹(yi)抗可(ke)減(jian)少操作(zuo)步(bu)驟，且(qie)不易(yi)出現(xian)背景問(wen)題，但敏(min)感性(xing)低於(yu)間接法，而且(qie)所(suo)用(yong)的(de)每(mei)壹(yi)種(zhong)抗體都(dou)必須(xu)分(fen)別進行標(biao)記(ji)。反(fan)之(zhi)，間接法敏(min)感性(xing)高、標記物(wu)的(de)應用(yong)範(fan)圍(wei)廣，且(qie)壹(yi)抗未(wei)經(jing)標(biao)記，故(gu)可(ke)避(bi)免其(qi)活性(xing)下降(jiang)。因此，多數情(qing)況(kuang)下用(yong)間接法。

直(zhi)接法和(he)間接法的選用(yong)

    當使(shi)用(yong)標(biao)記(ji)二(er)抗時(shi)，無須(xu)自(zi)己制(zhi)備標記反(fan)應(ying)試劑，可(ke)從(cong)許多廠商購(gou)買(mai)。有關試(shi)劑(ji)可(ke)大(da)批(pi)量(liang)制備並(bing)經(jing)過(guo)檢定(ding)，經(jing)濟(ji)實用(yong)。因此只要(yao)有(you)可(ke)能，推薦(jian)使(shi)用(yong)間接法和(he)商品化試(shi)劑。

    有時(shi)，必須(xu)使(shi)用(yong)直(zhi)接標記的抗體。zui常見(jian)的情(qing)況(kuang)是(shi)共(gong)定(ding)位研(yan)究(jiu)，即(ji)需(xu)要(yao)在(zai)同(tong)壹(yi)細(xi)胞(bao)或(huo)組織(zhi)標(biao)本(ben)中(zhong)定(ding)位分(fen)析兩種(zhong)或(huo)多種抗原。在(zai)這(zhe)種情(qing)況(kuang)下，每壹(yi)抗體都(dou)需(xu)經(jing)過(guo)純(chun)化並(bing)標記(ji)不同(tong)的(de)示蹤物(wu)，以(yi)便對相應抗原的(de)位(wei)置(zhi)做出對比。此外(wai)，當背景因素(su)影響(xiang)結(jie)果(guo)時(shi)，使(shi)用(yong)標(biao)記(ji)的(de)壹(yi)抗是(shi)行之(zhi)有(you)效的方(fang)法。zui後，在免(mian)疫(yi)分(fen)析中，必須(xu)使(shi)用(yong)標(biao)記(ji)的(de)壹(yi)抗才能得到(dao)準(zhun)確的檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)。