凝膠電(dian)泳前的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)烷化(hua)

 

    1．如果(guo)使(shi)用(yong)經免疫(yi)沈澱(dian)法得(de)到(dao)的(de)蛋(dan)白(bai)，按常規(gui)洗(xi)滌(di)免疫(yi)復(fu)合(he)物(wu)。盡(jin)可能*去除(chu)zui後的(de)洗(xi)液(ye)。如果(guo)使(shi)用(yong)其他來源的(de)蛋(dan)白(bai)，則將(jiang)其轉(zhuan)入(ru)20mmol／L的(de)磷(lin)酸(suan)鹽(yan)溶(rong)液(ye)中(pH7．0)，或直(zhi)接(jie)在20／1l水(shui)中重(zhong)懸(xuan)蛋(dan)白(bai)。蛋(dan)白(bai)濃度(du)應(ying)低(di)於lmg／m1。

 

    2．加(jia)入(ru)20u1．5％SDS和(he)20mmol／L DTI。

 

    3．加熱(re)至85C10min，仔(zai)細(xi)將(jiang)上(shang)清液移(yi)入(ru)另壹(yi)試(shi)管。

 

    4．加(jia)入10rd新鮮配制的(de)0．2mmol／LN-乙(yi)基(ji)順(shun)了(le)烯二酰(xian)亞胺(NEM)，12．5mg／m1的(de)水(shui)溶(rong)液為(wei)飽和(he)溶液(ye))，使(shi)用(yong)前臨(lin)時配制。85℃溫育10min，有利於NEM溶於溶(rong)液(ye)中。超聲水(shui)浴亦可起(qi)作(zuo)用(yong)，但是(shi)重(zhong)復(fu)抽吸即(ji)足以(yi)促(cu)溶。由(you)於溶(rong)液(ye)是(shi)飽和(he)的(de)，*液(ye)化(hua)不(bu)可能。另外，可將(jiang)NEM溶於20retool／L乙(yi)酸(suan)鈉中(pH 6．0)。

 

    5．置冰(bing)浴中60min。

 

    6．加入(ru)10ul 50％甘(gan)油，0．5mol／lp-巰(qiu)基(ji)乙(yi)醇(chun)和(he)0．001％的(de)溴(xiu)酚(fen)藍(lan)。

 

    至(zhi)此(ci)樣品可以(yi)進(jin)行(xing)電(dian)泳。