用(yong)多(duo)聚(ju)甲(jia)醛(quan)固定懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)

 

    常用(yong)的固定劑種(zhong)類(lei)很(hen)多(duo)，固定劑的正確(que)選擇取決於(yu)被(bei)研(yan)究(jiu)抗(kang)原(yuan)的(de)性質及(ji)所(suo)用(yong)抗(kang)體的特(te)性。固定劑可(ke)分為(wei)兩大(da)類(lei)：有(you)機(ji)溶劑和(he)交聯(lian)劑。有(you)機(ji)溶劑如乙(yi)醇(chun)和(he)丙(bing)酮(tong)能(neng)夠去(qu)除脂(zhi)類(lei)物質使(shi)細(xi)胞(bao)脫水，把蛋白(bai)質沈(chen)澱(dian)在細(xi)胞(bao)結(jie)構(gou)上。交聯(lian)劑壹(yi)般(ban)通(tong)過(guo)自(zi)由(you)氨(an)基基(ji)團(tuan)把生(sheng)物分子(zi)橋連(lian)起來，形(xing)成壹(yi)個(ge)相互連(lian)接的抗(kang)原(yuan)網(wang)。兩種(zhong)方法(fa)均使(shi)蛋白(bai)質抗(kang)原(yuan)部(bu)分(fen)變性(xing)。因(yin)此(ci)，在細(xi)胞(bao)染色中(zhong)，能夠識(shi)別(bie)變性蛋白(bai)的(de)抗(kang)體更加(jia)有(you)用。在某些(xie)情(qing)況(kuang)下，只有(you)用此類(lei)抗(kang)體才能(neng)得(de)到(dao)滿意(yi)的(de)結(jie)果。

 

    往往憑經(jing)驗(yan)選擇固定劑。雖然許(xu)多(duo)人發(fa)現用(yong)交聯(lian)劑固定細胞可(ke)以(yi)獲得(de)較好(hao)的(de)結(jie)果，但沒有(you)通用規(gui)則(ze)可(ke)以(yi)參(can)考。可(ke)以(yi)試用(yong)兩種(zhong)方法(fa)，然後選擇較(jiao)好(hao)的(de)壹(yi)種(zhong)。

 

    懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)染色通(tong)常用(yong)於(yu)檢測細胞表(biao)面抗(kang)原(yuan)。因(yin)為(wei)細(xi)胞(bao)呈(cheng)懸(xuan)浮狀(zhuang)態(tai)，洗(xi)滌(di)過(guo)程復雜(za)，因(yin)此(ci)，應(ying)註意(yi)離(li)心時(shi)間(jian)不要過(guo)長或轉(zhuan)速(su)太高(gao)。

 

    1．所需(xu)溶液

    4％多(duo)聚(ju)甲(jia)醛(quan)(臨用(yong)前配制(zhi))、PBS。

 

    2．操作步(bu)驟(zhou)

    (1)PBS配制(zhi)4％多(duo)聚(ju)甲(jia)醛(quan)；

    (2)用PBS洗(xi)滌(di)細胞2次，用(yong)200g離(li)心5min；重懸(xuan)細胞(bao)。

    (3)小心(xin)用4％多(duo)聚(ju)甲(jia)醛(quan)溶液懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)約(yue)為1X106／m1 15min，間(jian)或搖動(dong)；

    (4)200g離(li)心5rain，用(yong)PBS重懸(xuan)細胞(bao)，重復洗(xi)滌(di)細胞2次；室溫下靜(jing)置

    (5)用含(han)0．2％TritonX-100或(huo)NP-40的PBS溶液透化(hua)細胞(bao)2min(室溫)，有(you)的抗(kang)原(yuan)需(xu)15min，具體時(shi)間(jian)視(shi)抗(kang)原(yuan)而(er)定；

    (6)200g離(li)心5rain，用(yong)PBS重懸(xuan)細胞(bao)，重復洗(xi)滌(di)細胞2次。 

    此(ci)時(shi)的細(xi)胞標(biao)本可(ke)用於(yu)後續的抗(kang)體檢測。