用人(ren)血清進行噬(shi)菌(jun)體ElISA

 

[器(qi)材和試(shi)劑(ji)]

● 包(bao)被(bei)緩沖(chong)液(ye)

● PBST

● PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％ BSA（Sigma）]

● 兔抗人(ren)Fc—特異性(xing)IgG（Pierce）：用包(bao) 被緩沖(chong)液(ye)稀釋為5．0ug/ml①

● HRP標記(ji)的(de)抗噬(shi)菌(jun)體抗體（Amersham Biosciences）：用封閉(bi)液(ye)以(yi)1/10000比例(li) 稀釋

● 顯色(se)液(ye)[3，3’，5，5’—四(si)甲基(ji)聯(lian)苯(ben)胺 （TMB）液(ye)體底(di)物系統(tong)，Sigma]

 

[方(fang)法]

1．將(jiang)200ul兔抗人(ren)Fc—特異性(xing)IgG等(deng)量(liang)分加到(dao)各孔(kong)中。4℃孵育過(guo)夜(ye)。

2．用PBST洗(xi)滌多孔(kong)板。

3．加250ul PBBST。37℃孵(fu)育2小(xiao)時(shi)。

4．棄(qi)去PBBST，將(jiang)200ul噬(shi)菌(jun)體上清(qing)等量加入(ru)各孔。每孔中(zhong)加入(ru)0．25ul血清，37℃振(zhen) 蕩孵(fu)育60分鐘(zhong)。

5，用PBST洗(xi)滌板孔。

6．加200gl HRP標記(ji)的(de)羊抗噬(shi)菌(jun)體抗體。37℃振(zhen)蕩孵(fu)育30分鐘(zhong)。

7．用PBST洗(xi)滌板孔。

8．每孔中(zhong)加200ul顯色(se)液(ye)。室(shi)溫避光(guang)孵(fu)育15分鐘(zhong)。加25ul 2mol/L H2S04終(zhong)止反(fan)應。分 析(xi)前(qian)在(zai)酶標儀中(zhong)振(zhen)蕩10秒(miao)。

9．用自(zi)動(dong)酶(mei)標儀將(jiang)A₄₀₅和A₆₅₅間(jian)的(de)差(cha)值(zhi)作(zuo)為結果記(ji)錄(lu)。