藥(yao)敏實(shi)驗方(fang)法

                                      藥(yao)敏實(shi)驗方(fang)法

1.實(shi)驗材料(liao)：

1.1培養基：如做(zuo)大腸桿菌的藥(yao)敏試(shi)驗可選擇(ze)普(pu)通營(ying)養瓊脂(zhi)或(huo)麥康凱培養基，做(zuo)沙門氏(shi)菌可選(xuan)擇(ze)SS培養基，巴(ba)氏(shi)桿菌可選(xuan)擇(ze)血液瓊脂(zhi)。

1.2藥(yao)敏試(shi)紙(zhi)：購(gou)買、自(zi)制(zhi)或(huo)廠(chang)家(jia)提供

1.3細(xi)菌：從(cong)病(bing)雞病變部(bu)位(wei)提取(qu)，如肝臟、心(xin)臟(zang)、脾(pi)臟等臟(zang)器(qi)。

1.4接種(zhong)環、酒(jiu)精燈(deng)、打(da)孔器(qi)、牛(niu)津(jin)杯(bei)

1.5移液器(qi)、滴頭(tou)

 

2.實驗(yan)準(zhun)備：

2.1藥(yao)敏片(pian)的(de)準備：自(zi)制(zhi)

2.1.1藥(yao)敏片(pian)的(de)制(zhi)備：取(qu)定性(xing)濾(lv)紙(zhi)，用(yong)打(da)孔機(ji)打(da)成6毫米(mi)直(zhi)徑(jing)的(de)圓(yuan)形(xing)小紙(zhi)片(pian)，取(qu)圓紙(zhi)片(pian)50片(pian)放(fang)入(ru)清潔幹燥的青(qing)黴(mei)素空(kong)瓶(ping)中(zhong)，瓶(ping)口(kou)以單(dan)層(ceng)牛(niu)皮紙(zhi)包紮，經(jing)15磅(bang)15-20分鐘(zhong)高壓(ya)消(xiao)毒後(hou)，放(fang)在(zai)37℃溫(wen)箱(xiang)或(huo)烘(hong)箱中(zhong)數(shu)天(tian)，使(shi)*幹燥。

2.2.2抗菌藥(yao)紙(zhi)片(pian)制(zhi)作：在(zai)上述含(han)有(you)50片(pian)紙(zhi)片(pian)的(de)青黴(mei)素瓶(ping)內(nei)加入藥(yao)液適(shi)量，並翻動紙(zhi)片(pian)，使(shi)各(ge)紙(zhi)片(pian)充(chong)分浸(jin)透(tou)藥(yao)液，翻(fan)動紙(zhi)片(pian)時(shi)不能將(jiang)紙(zhi)片(pian)搗(dao)爛(lan)。同(tong)時(shi)在(zai)瓶(ping)口(kou)上記錄(lu)藥(yao)物名(ming)稱(cheng)，放(fang)37℃溫(wen)箱(xiang)內(nei)過夜(ye)，幹燥後(hou)即密(mi)封(feng)，切勿受(shou)潮(chao)，置陰暗幹燥處存(cun)放(fang)，有(you)效期3-6個月(yue)。

2.2藥(yao)液的(de)制(zhi)備（用(yong)於(yu)商品(pin)藥(yao)的試(shi)驗）：按商品(pin)藥(yao)治療(liao)量(liang)3-5倍比(bi)例配制(zhi)藥(yao)液；如(ru)治療(liao)量(liang)為(wei)1L水加1g藥(yao)，配制(zhi)藥(yao)液時(shi)就是(shi)1g加200-300ml水或(huo)1L水加3-5g藥(yao)，及配(pei)制(zhi)藥(yao)敏片(pian)所用的(de)藥(yao)液。

 

3.實驗操作方(fang)法：

3.1藥(yao)敏片(pian)法(fa)

3.1.1在(zai)“超(chao)凈臺”（或(huo)自(zi)制(zhi)無菌操作(zuo)臺(tai)）中(zhong)，用（酒(jiu)精燈(deng)）經(jing)火焰滅菌的接(jie)種(zhong)環從(cong)病(bing)料中(zhong)挑取(qu)適量(liang)細(xi)菌培養物，以劃線方(fang)式將(jiang)細(xi)菌塗(tu)布到(dao)平(ping)皿培養基上。具(ju)體方(fang)式：用(yong)滅菌接種(zhong)環取(qu)適量(liang)細(xi)菌分別(bie)在(zai)平(ping)皿邊緣(yuan)相(xiang)對四點塗(tu)菌，以每點開(kai)始(shi)劃線塗(tu)菌至平(ping)皿的(de)1/2，然後(hou)找到(dao)第(di)二(er)點劃線至平(ping)皿的(de)1/2，依次(ci)劃線，直至細(xi)菌均勻(yun)密(mi)布於(yu)平(ping)皿。（另：可將待試(shi)細(xi)菌於(yu)少(shao)量生(sheng)理鹽水中(zhong)制(zhi)成細(xi)菌混(hun)懸液(ye)，將少量混(hun)懸液(ye)倒(dao)入(ru)平(ping)皿培養基上，輕(qing)晃平(ping)皿使(shi)鋪勻，放(fang)置5-10min）。

3.1.2將(jiang)鑷(nie)子(zi)於(yu)酒(jiu)精燈(deng)火(huo)焰滅菌後(hou)略(lve)停，取(qu)藥(yao)敏片(pian)貼(tie)到平(ping)皿培養基表面(mian)。為了(le)使(shi)藥(yao)敏片(pian)與(yu)培養基緊密(mi)相貼(tie)，可用鑷(nie)子(zi)輕按(an)幾(ji)下(xia)藥(yao)敏片(pian)。為(wei)了(le)使(shi)能準(zhun)確的觀察(cha)結(jie)果(guo)，要(yao)求(qiu)藥(yao)敏片(pian)能有(you)規(gui)律的分(fen)布於(yu)平(ping)皿培養基上，壹(yi)般(ban)可(ke)在(zai)平(ping)皿中(zhong)央(yang)貼(tie)壹(yi)片(pian)，外周(zhou)可(ke)等距離(li)貼(tie)若(ruo)幹片(pian)（外周(zhou)壹(yi)般(ban)可(ke)貼(tie)4-5片(pian)），每種(zhong)藥(yao)敏片(pian)的(de)名稱(cheng)要(yao)記住。

3.1.3將平(ping)皿培養基倒(dao)置放(fang)於(yu)37℃溫(wen)箱(xiang)中(zhong)培養24小時後(hou)，觀察(cha)效果。

 

4.結(jie)果(guo)觀(guan)察(cha)：

在(zai)塗(tu)有(you)細(xi)菌的瓊脂(zhi)平(ping)板上，抗菌藥(yao)物在(zai)瓊脂(zhi)內(nei)向四周擴散，其濃(nong)度(du)呈(cheng)梯(ti)度(du)遞(di)減，因此(ci)在(zai)紙(zhi)片(pian)周(zhou)圍壹(yi)定(ding)距離(li)內(nei)的細(xi)菌生(sheng)長受(shou)到(dao)抑(yi)制(zhi)。過夜(ye)培養後(hou)形成(cheng)壹(yi)個(ge)抑(yi)菌圈(quan)，抑(yi)菌圈(quan)越大，說明(ming)該菌對此(ci)藥(yao)敏感性(xing)越大，反之(zhi)越(yue)小，若(ruo)無(wu)抑(yi)菌圈(quan)，則說(shuo)明(ming)該(gai)菌對此(ci)藥(yao)具有(you)耐藥(yao)性(xing)。其直徑(jing)大小與藥(yao)物濃(nong)度(du)、劃線細(xi)菌濃(nong)度(du)有(you)直接(jie)關系(xi)。

 

5.判(pan)定(ding)標(biao)準：

5.1藥(yao)敏實(shi)驗的結(jie)果(guo)，應(ying)按(an)抑(yi)菌圈(quan)直徑(jing)大小作為判(pan)定(ding)敏(min)感度(du)高低的(de)標(biao)準(zhun)。

  表(biao)1  藥(yao)物敏(min)感實驗(yan)判(pan)定(ding)標(biao)準

 

敏感度(du)

 

20以(yi)上

 

極敏(min)

 

15-20

 

高敏(min)

 

10-14

 

中(zhong)敏

 

10以(yi)下(xia)

 

低敏(min)

 

0

不敏(min)

   

5.2 藥(yao)物敏(min)感實驗(yan)判(pan)定(ding)標(biao)準參(can)考表(biao)1，抑(yi)菌圈(quan)直徑(jing)在(zai)15毫(hao)米以上為(wei)高敏(min)，10毫(hao)米(mi)以下(xia)為(wei)低敏(min)，無(wu)抑(yi)菌圈(quan)為不(bu)敏(min)。

 

6.影(ying)響藥(yao)敏結(jie)果(guo)的(de)因素：

6.1培養基：應根據試驗(yan)菌的營(ying)養需要(yao)進行配(pei)制(zhi)。傾註(zhu)平(ping)板時(shi)，厚度(du)合適（約5-6mm），不(bu)可太薄，壹(yi)般(ban)90mm直(zhi)徑(jing)的培養皿，傾註(zhu)培養基18-20ml為(wei)宜。培養基內(nei)應盡量避(bi)免有(you)抗菌藥(yao)物的(de)拮抗物質(zhi)，如(ru)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)能減低氨(an)基糖苷類(lei)的抗菌活性(xing)，胸腺嘧(mi)啶(ding)核(he)苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮(jie)抗磺(huang)胺(an)藥(yao)和TMP的活性(xing)。

6.2細(xi)菌接種(zhong)量：細(xi)菌接種(zhong)量應(ying)恒(heng)定(ding)，如太多，抑(yi)菌圈(quan)變小，能產(chan)酶的(de)菌株更(geng)可(ke)破(po)壞藥(yao)物的(de)抗菌活性(xing)。

6.3藥(yao)物濃(nong)度(du)：藥(yao)物的(de)濃(nong)度(du)和總量直接影(ying)響抑(yi)菌試驗(yan)的(de)結(jie)果(guo)，需配(pei)制(zhi)。

6.4培養時間：壹(yi)般(ban)培養溫(wen)度(du)和時間為37℃、12-24小時，有(you)些抗菌藥(yao)擴散慢如(ru)多粘菌素，可將(jiang)已(yi)放(fang)好(hao)抗菌藥(yao)的平(ping)板培養基，先置4℃冰箱內(nei)2-4小時，使(shi)抗菌藥(yao)預擴(kuo)散，然後(hou)再放(fang)37℃溫(wen)箱(xiang)中(zhong)培養，可以推遲(chi)細(xi)菌的生(sheng)長，而(er)得到較大的抑(yi)菌圈(quan)。

 

7.應(ying)用(yong)

藥(yao)敏實(shi)驗後(hou)，應選(xuan)擇(ze)高敏(min)藥(yao)物進(jin)行治療(liao)，也(ye)可選(xuan)用兩(liang)種(zhong)藥(yao)物協(xie)助使(shi)用(yong)，以(yi)減少耐(nai)藥(yao)菌株。選(xuan)擇(ze)高敏(min)藥(yao)物時(shi)應考慮(lv)藥(yao)物的(de)吸收(shou)途徑(jing)，因為我們藥(yao)敏實(shi)驗是(shi)藥(yao)液直(zhi)接和細(xi)菌接觸(chu)，而(er)在(zai)給(gei)禽用(yong)藥(yao)的時(shi)候(hou)，必須(xu)通過機體(ti)的(de)吸收(shou)才能使(shi)藥(yao)物達到壹(yi)定(ding)的(de)效果，所以在(zai)給(gei)禽用(yong)藥(yao)時，高敏(min)藥(yao)物壹(yi)定(ding)要(yao)配(pei)合適宜的(de)給(gei)藥(yao)方(fang)法，這(zhe)樣(yang)才(cai)會(hui)達到好(hao)的治療(liao)效果。

附(fu)表2  山東省2004年(nian)1-5月(yue)份大腸桿菌和沙門氏(shi)菌常(chang)用藥(yao)物敏(min)感程度(du)參(can)考表(biao)

藥(yao)物    

大腸桿菌 （細(xi)菌）

沙門氏(shi)菌（細(xi)菌）

QD-1（菌株）

LC-5

JN-7

LY-1

RZ-5

QD-2

JN-8

LY-1

 

新(xin)黴(mei)素

20（抑(yi)菌）

18

14

25

26

23

18

16

先鋒(feng)必

28

26

30

29

32

33

31

26

氟苯尼考

22

21

14

18

30

28

24

21

慶大黴(mei)素

15

0

0

12

19

17

12

12

諾(nuo)氟沙星(xing)

10

12

13

12

20

20

11

21

氧(yang)氟沙星(xing)

12

13

13

11

23

22

15

12

先鋒(feng)五(wu)號(hao)

19

23

20

18

28

26

21

22

蒽諾(nuo)沙星(xing)

12

14

15

13

20

16

13

16

丁胺(an)卡(ka)那

17

19

12

22

32

30

14