重(zhong)組質體(ti)的限制酶(mei)分(fen)析

    儀(yi)器(qi)用(yong)具(ju)：

    微(wei)量離心(xin)機(ji)

    冰(bing)浴(yu)

    Mupid II 迷(mi)妳電泳(yong)槽(cao)及鑄膠器(qi)

    UV transilluminator 及(ji)影像分(fen)析系(xi)統(tong)

    防護(hu)面罩(zhao)

 

    藥品(pin)試劑(ji)：

    限制酶(mei)：BamHI, HindIII （20 U/μL, BioLabs）

    10×NE Buffer BamHI （0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol）

    100×BSA （10 mg/mL bovine serum albumin） 使用(yong)前(qian)稀(xi)釋十倍成(cheng)10×無(wu)菌水

 

    方(fang)法(fa)步(bu)驟：

    1） 正反應株(zhu)，接(jie)種(zhong)於3 mL LB/Amp 培養基，於(yu)37℃震蕩(dang)培養過夜後(hou)，以(yi)2.1 的方(fang)法(fa)抽取(qu)質體(ti)。

    2） 每(mei)壹(yi)株(zhu)每(mei)反(fan)應各(ge)取(qu)3 μL 質體(ti)，另取(qu)pQE31 及(ji)pBlueGus 每(mei)反(fan)應各(ge)3 μL，分(fen)別依(yi)下(xia)表(biao)進行HindIII 及BamHI 切(qie)割(ge)。

    3） 以(yi)1% agarose gel 進行電(dian)泳(yong)分(fen)析，由電泳(yong)圖(tu)譜挑(tiao)選(xuan)帶(dai)有(you)gus DNA 片段(duan)的重(zhong)組質體(ti)。

􀂋  照相後(hou)的(de)電泳(yong)膠片不要(yao)丟掉(diao)，可繼續(xu)進行Southern 轉(zhuan)印。

    限制酶(mei)分(fen)析請(qing)依照下列表(biao)格(ge)加入：

     # 各(ge)管置請(qing)於37℃反應至(zhi)少(shao)1 h。