cisbio 磷酸組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 細(xi)胞(bao)試劑盒(he)

cisbio 磷(lin)酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 細(xi)胞(bao)試劑盒(he)

cisbio 磷酸組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 細(xi)胞(bao)試劑盒(he)

概述：磷酸化(hua)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 檢(jian)測能(neng)夠(gou)檢(jian)測組(zu)蛋白(bai) H3 尾部的(de) Ser10 磷(lin)酸(suan)化(hua)，組(zu)蛋白(bai) H3 是基(ji)因(yin)表(biao)達(da)和有絲分(fen)裂的(de)關(guan)鍵(jian)調(tiao)節(jie)因(yin)子(zi)。Ser10 的(de)磷(lin)酸(suan)化(hua)與(yu)有絲分(fen)裂和減數分(fen)裂期(qi)間的(de)染(ran)色體濃縮(suo)密切(qie)相關。

磷(lin)酸(suan)化(hua)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 檢(jian)測可(ke)測(ce)量在 Ser10 位點(dian)磷酸(suan)化(hua)的(de)組(zu)蛋白(bai) H3。與 Western Blot 不(bu)同，該(gai)檢(jian)測基(ji)於(yu)平(ping)板，不需要凝(ning)膠(jiao)、電泳(yong)或轉(zhuan)移(yi)。磷酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 檢(jian)測使(shi)用(yong) 2 種標(biao)記抗(kang)體：壹種(zhong)帶(dai)有(you)供體熒光(guang)團(tuan)，另(ling)壹種(zhong)帶(dai)有(you)受(shou)體。選(xuan)擇(ze)第(di)壹種(zhong)抗(kang)體是因(yin)為(wei)它(ta)能(neng)特(te)異(yi)性(xing)結合(he)蛋白(bai)質上(shang)的(de)磷(lin)酸(suan)化(hua)基(ji)序(xu)，第(di)二(er)種是因(yin)為(wei)它(ta)能(neng)夠(gou)獨立於(yu)蛋白(bai)質的(de)磷(lin)酸(suan)化(hua)狀(zhuang)態識(shi)別(bie)蛋白(bai)質。蛋白(bai)質磷(lin)酸(suan)化(hua)能(neng)夠(gou)形(xing)成(cheng)涉(she)及標(biao)記抗(kang)體的(de)免疫(yi)復(fu)合(he)物(wu)，並使(shi)供體熒光(guang)團(tuan)靠(kao)近受(shou)體，從(cong)而(er)產(chan)生 FRET 信(xin)號(hao)。

磷酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 2 板檢(jian)測方(fang)案(an)

2 板協議(yi)涉(she)及在裂(lie)解前(qian)在(zai) 96 孔板中培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，然(ran)後(hou)將(jiang)裂(lie)解物(wu)轉(zhuan)移(yi)到(dao) 384 孔低體積檢(jian)測板，然後(hou)添加磷(lin)酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) HTRF 檢(jian)測試劑。該(gai)協議(yi)使(shi)細(xi)胞(bao)的(de)生存能(neng)力(li)和匯(hui)合(he)度得(de)到(dao)監(jian)測。

磷酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 1 板測定(ding)方(fang)案(an)

使(shi)用(yong) HTRF 試劑檢(jian)測磷(lin)酸(suan)化(hua)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 可以在用(yong)於(yu)培(pei)養(yang)、刺激(ji)和裂解的(de)單(dan)個板中進行(xing)。無(wu)需洗滌(di)步驟。這(zhe)種(zhong) HTS 設計(ji)的(de)協(xie)議(yi)可(ke)實(shi)現(xian)小型(xing)化(hua)，同時保持穩健的(de) HTRF 質量。

HTRF 磷酸組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 檢(jian)測與(yu)蛋白(bai)質印(yin)跡法(fa)的(de)比較(jiao)

將(jiang)指(zhi)數生長的(de) Hela 細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)至 80% 匯(hui)合(he)度，並用諾(nuo)考(kao)達唑(zuo)處理(li) 16 小時。培(pei)養(yang)基(ji)去(qu)除(chu)和裂解後(hou)，通(tong)過(guo)離(li)心收(shou)集可溶(rong)性(xing)上(shang)清液。等量的(de)裂(lie)解物(wu)用於(yu) WB 和 HTRF 的(de)並排比較(jiao)。HTRF 檢(jian)測的(de)靈敏度是 Western Blot 的(de) 25 倍(bei)。使(shi)用(yong) HTRF 磷酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10)，僅 256 個細(xi)胞(bao)就足以進行(xing)很小信(xin)號(hao)檢(jian)測，而(er) Western Blot 信(xin)號(hao)則需要 6,400 個細(xi)胞(bao)。HTRF 檢(jian)測的(de)靈敏度是 Western Blot 的(de) 25 倍(bei)。

磷(lin)酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 作為(wei)細(xi)胞(bao)增殖的(de)有(you)絲分(fen)裂生物(wu)標(biao)誌(zhi)物(wu)

將(jiang) Hela 和 A431 細(xi)胞(bao)接(jie)種在 96 孔板中，並用 Nocodazole 處(chu)理(li) 16 小時，Nocodazole 是(shi)壹種(zhong)抗(kang)有(you)絲分(fen)裂劑，可(ke)解聚微管並在組(zu)蛋白(bai) H3 Ser10 磷酸(suan)化(hua)達(da)到(dao)很大(da)時阻斷細(xi)胞(bao)有(you)絲分(fen)裂。去(qu)除細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)，加入(ru) 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解緩(huan)沖(chong)液孵(fu)育(yu) 30 分(fen)鐘。將(jiang) 16 µl 的(de)每種裂(lie)解物(wu)轉(zhuan)移(yi)到(dao) 384sv 白(bai)板上進行(xing) HTRF 分(fen)析。將(jiang)裂(lie)解體積增加至(zhi) 200µl 可(ke)改善(shan) HTRF 檢(jian)測信(xin)號(hao)的(de)線性(xing)度。

磷酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3 (Ser10) 作為(wei)極(ji)光(guang)激(ji)酶(mei) B 抑制(zhi)的(de)讀(du)數

細(xi)胞(bao)周(zhou)期中的(de)磷(lin)酸(suan)組(zu)蛋白(bai) H3-Ser10

總(zong)體組(zu)蛋白(bai)磷酸(suan)化(hua)在(zai)細(xi)胞(bao)周(zhou)期期間波動非(fei)常顯(xian)著(zhe)，其特(te)征(zheng)在(zai)於(yu)有絲分(fen)裂中(zhong)絲氨酸 10 上(shang)組(zu)蛋白(bai) H3 磷酸(suan)化(hua)的(de)峰值。極(ji)光(guang)激(ji)酶(mei) B 直接(jie)負責(ze)有(you)絲分(fen)裂組(zu)蛋白(bai) H3 Ser10 磷酸(suan)化(hua)。與(yu) BORA 復合(he)的(de) Aurora 激(ji)酶(mei) A 負(fu)責(ze)在 G2 期初始激(ji)活(huo) PLK1，導(dao)致(zhi)在 G2/M 轉(zhuan)換(huan)檢(jian)查點(dian)激(ji)活(huo)細(xi)胞(bao)周(zhou)期蛋白(bai)依賴(lai)性激(ji)酶(mei) 1 有絲分(fen)裂進入(ru)。極(ji)光(guang)激(ji)酶(mei) A 在人類(lei)癌(ai)癥(zheng)中(zhong)經常被擴增，極(ji)光(guang)激(ji)酶(mei) A 在人類(lei)腫(zhong)瘤中的(de)過(guo)度表(biao)達(da)與(yu)不(bu)良預(yu)後(hou)和基(ji)因(yin)組(zu)不穩(wen)定相關。此(ci)外，極(ji)光(guang)激(ji)酶(mei) B 的(de)高(gao)表(biao)達(da)水(shui)平(ping)與膠(jiao)質母細(xi)胞(bao)瘤、卵巢(chao)癌和肝(gan)細(xi)胞(bao)癌(ai)的(de)不(bu)良預(yu)後(hou)相關。