L-異(yi)亮(liang)氨(an)酸甲(jia)酯(zhi)鹽(yan)酸鹽說(shuo)明(ming)書，L-異(yi)亮(liang)氨(an)酸甲(jia)酯(zhi)鹽(yan)酸鹽資料

1．為了洗(xi)脫(tuo)細(xi)菌，將BL21或(huo)BLT5615過(guo)夜培(pei)養的(de)菌液用M9LB稀(xi)釋到在600nm處(chu)OD值(zhi)為1。如果(guo)使(shi)用BLT5615菌株與(yu)T7Selectl—1或(huo)T7Selectl0—3載體，就必(bi)須向菌液中(zhong)加入(ru)IPTG，使(shi)其(qi)終濃(nong)度(du)為10umol/L。

2．將900/21該(gai)菌液加(jia)到裂解後的(de)細(xi)胞中(zhong)，於(yu)室溫(wen)下孵(fu)育10分(fen)鐘。

3．為了測定(ding)T7噬(shi)菌體的(de)產出量，從(cong)步(bu)驟2的(de)試管中分(fen)別取(qu)1ul 1：10稀(xi)釋液、1ul原(yuan)液和10ul原液鋪(pu)板(ban)，每(mei)種(zhong)鋪(pu)3個(ge)：分(fen)別取(qu)1ul 1：10稀(xi)釋液、1ul原(yuan)液和10ul原液加(jia)入(ru)14ml 聚(ju)苯乙(yi)烯(xi)管(guan)中， 同時還加入300rrl的(de)BL21或BLT5615（含(han)IPTG） 菌液，並(bing)與(yu)4ml熔化的(de)（45～50℃）上層瓊脂混合。將含(han)有(you)噬(shi)菌體和細(xi)菌的(de)上層瓊脂倒於(yu)LB瓊脂（BL21）平板(ban)上，或(huo)是(shi)倒(dao)在(zai)含(han)50gg/ml羧芐(bian)青黴素(su)的(de)LB瓊脂（BLT5615）平板(ban)上。將平(ping)板(ban)置於(yu)37℃孵(fu)育1，5～3小(xiao)時(shi)，或室溫(wen)下孵(fu)育過夜。

4．為了測定(ding)每(mei)份器官(guan)或組織的(de)噬(shi)菌體總的(de)產出量，將每(mei)個(ge)平(ping)板(ban)上的(de)噬(shi)菌斑(ban)（pfu）數(shu)目(mu)除(chu)以鋪(pu)板(ban)體(ti)積（0．1ul、1ul或(huo)10ul），然(ran)後再乘(cheng)以(yi)1000ul。這樣計算的(de)原因是(shi)每(mei)份細(xi)胞沈(chen)澱中添(tian)加(jia)了1000gl菌液。例(li)如：在(zai)腦(nao)組(zu)織(zhi)的(de)1ul培(pei)養基平板中平(ping)均(jun)有(you)200pfu的(de)噬(shi)菌體，那(na)麽在(zai)腦(nao)組(zu)織(zhi)中(zhong)噬(shi)菌體總產出量為2．0×105pfu/g。對每(mei)份器官(guan)和組織中(zhong)的(de)3個(ge)平(ping)板(ban)的(de)計數(shu)取(qu)平均(jun)值(zhi)，對(dui)數(shu)據作(zuo)圖(tu)。

5．為了擴增(zeng)及純化回收(shou)的(de)T7噬(shi)菌體，將步(bu)驟(zhou)2所剩(sheng)的(de)噬(shi)菌體加(jia)到10ml在600nm處(chu)OD值(zhi)為0．5的(de)BL21或BLT5615（加(jia)有10mmol/L的(de)IPTG） 菌液中(zhong)。於(yu)37℃搖(yao)瓶培(pei)養2小(xiao)時(shi)，直到菌液被裂解並(bing)變(bian)澄清。

6．將菌液倒(dao)入30ml的(de)Oak Ridge離心管(guan)中(zhong)，並(bing)在(zai)Sorvall SS—34或(huo)同(tong)等的(de)轉(zhuan)子(zi)中， 以8000r/min（7670g）離心10分(fen)鐘。通過帶(dai)0，2um濾(lv)頭的(de)註射器將每(mei)份上清(qing)分(fen)別過濾(lv)到50m1無(wu)菌錐形瓶中，並(bing)保存於(yu)4℃。T7培(pei)養物上清(qing)典型(xing)的(de)滴(di)定(ding)量(liang)為107pfu/ul。我們采(cai)用T7溶(rong)菌液直接進行(xing)下面的(de)實驗，而沒(mei)有用沈澱法(fa)進行(xing)進壹步的(de)純化。

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