N-乙酰(xian)-DL-絲(si)氨(an)酸(suan)說(shuo)明書，N-乙酰(xian)-DL-絲(si)氨(an)酸(suan)資(zi)料

[器材(cai)和試(shi)劑]
● PCR試(shi)劑和設備(bei)。除(chu)了(le)用(yong)Taq聚(ju)合(he)酶(mei)緩(huan)沖(chong)液替(ti)代(dai)Vent聚合(he)酶(mei)緩(huan)沖(chong)液。各(ge)自在(zai)適宜(yi)緩(huan)沖(chong)液中(zhong)保(bao)存的Tdg聚(ju)合酶(mei)，均可使(shi)用。
● V區特(te)異(yi)性正向(xiang) （3’）（JκFORNot和JλFORNot）和反向(xiang)（5’） （VHBACKSfi PCR引(yin)物(wu)
● 已組(zu)裝的scFv基因(yin)文(wen)庫(ku)
● Wizard PCR純(chun)化(hua)試(shi)劑盒(he)（Promega）

[方法(fa)]
1．在0．5ml微量離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，配(pei)制兩(liang)個50/z1PCR反應混(hun)合(he)液（1個(ge)用(yong)於(yu)VH—VκscFv文(wen)庫(ku)， 另1個(ge)用(yong)於(yu)Vu—Vλ scFv文(wen)庫(ku)），其(qi)中(zhong)含(han)有：
● 水，36．5//1
● 10XTag緩(huan)沖(chong)液，5．0ul
● 20XdNTP， 2．5ul
● 正(zheng)向(xiang)引(yin)物，2．0ul
● 反向引(yin)物，2．0ul
● scFv基因(yin)文(wen)庫(ku)（約(yue)long）， 1．0ul
2．在熱循環(huan)儀(yi)格內(nei)加熱(re)反(fan)應管到(dao)94℃，5分鐘(zhong)。如(ru)果沒(mei)有加熱(re)蓋，則(ze)滴(di)加1滴(di)輕(qing)質礦(kuang)物油(you)覆(fu)蓋反應(ying)液。
3．加入(ru)1．0ul（5單(dan)位(wei)）TdQDNA聚合(he)酶(mei)。
4．以(yi)94℃ 1分(fen)鐘(zhong)、55℃ 1分鐘、72℃ 1分鐘(zhong)的(de)條(tiao)件(jian)共(gong)循環25次，擴(kuo)增scFv基因(yin)。
5．用(yong)Wizard PCR純化(hua)試(shi)劑盒(he)，純化(hua)PCR產物(wu)。

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