培養(yang)基(ji)定(ding)義(yi)與(yu)分(fen)類(lei)

培養(yang)基(ji)的基(ji)本(ben)成(cheng)分(fen)

能(neng)源(yuan)、碳(tan)源(yuan)：自(zi)養微生物以二氧(yang)化(hua)碳為碳(tan)源(yuan)，光(guang)或無機物為能(neng)源(yuan)，在無機物組(zu)成(cheng)的培養(yang)基(ji)中(zhong)生長。例(li)如(ru)化能(neng)自養(yang)型(xing)的氧(yang)化(hua)硫桿菌培養(yang)基(ji)中(zhong)，加(jia)進(jin)粉(fen)末狀(zhuang)硫為能(neng)源(yuan)，以空(kong)氣(qi)中(zhong)的CO2為碳(tan)源(yuan)。異(yi)養微生物以有機物為碳(tan)源(yuan)和能(neng)源(yuan)，培(pei)養基(ji)中(zhong)常需(xu)加(jia)進(jin)葡萄(tao)糖(tang)、蔗糖(tang)或麥芽(ya)糖(tang)、乳(ru)糖(tang)等(deng)單糖(tang)或雙(shuang)糖(tang)，有的可(ke)利用澱粉(fen)、纖(xian)維(wei)素等(deng)多糖(tang)，或利用動(dong)物組(zu)織中(zhong)的糖(tang)類(lei)。例(li)如(ru)培養細(xi)菌常用(yong)的牛(niu)肉(rou)膏(gao)蛋(dan)白腖(dong)培(pei)養基(ji)，其(qi)中(zhong)牛(niu)肉(rou)膏(gao)即為主(zhu)要(yao)碳源(yuan)和能(neng)源(yuan)。(培(pei)養基(ji)配(pei)方(fang)見(jian)後(hou)，下(xia)同)。

氮源(yuan)：自(zi)養微生物以含氮無機物銨鹽、硝(xiao)酸鹽等(deng)為氮素營養，例(li)如(ru)氧(yang)化(hua)硫桿菌以(NH4)2SO4為氮源(yuan)；異(yi)養微生物以無機物銨鹽、硝(xiao)酸鹽或(huo)含(han)氮有(you)機物為氮源(yuan)。自(zi)生固(gu)氮菌(jun)利用空(kong)氣(qi)中(zhong)的N2為氮素營養，其(qi)培(pei)養基(ji)中(zhong)無須(xu)加(jia)進(jin)氮源(yuan)，稱(cheng)為無氮培(pei)養(yang)基(ji)。

礦(kuang)質元(yuan)素、生長因子(zi)：微(wei)生物生長繁(fan)殖(zhi)需(xu)要(yao)P、K、Na、S、Mg、Ca等(deng)主(zhu)要(yao)礦(kuang)質元(yuan)素以及Fe、Cu等(deng)微量元素，因此(ci)培(pei)養基(ji)中(zhong)常加(jia)進(jin)K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、KCl、FeSO4等(deng)無機鹽類(lei)；生長因子(zi)主(zhu)要(yao)是調節(jie)微(wei)生物代謝(xie)活動的B族維生素，常由(you)酵(jiao)母(mu)膏(gao)、肝(gan)浸出(chu)液(ye)等(deng)提(ti)供。很多(duo)自(zi)然(ran)成(cheng)分(fen)的原料如(ru)牛(niu)肉(rou)膏(gao)、麥芽(ya)汁、玉(yu)米(mi)粉、芽(ya)菜(cai)汁等(deng)，含有各種無機元素和生長因子(zi)，不(bu)需(xu)另(ling)外(wai)添加(jia)。

培(pei)養(yang)基(ji)的類(lei)型(xing) 根據(ju)原料來源(yuan)不(bu)同，可(ke)將(jiang)培(pei)養(yang)基(ji)分(fen)為合(he)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)、半(ban)合(he)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)與(yu)自(zi)然(ran)培(pei)養(yang)基(ji)。

合(he)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)：由(you)化(hua)學成(cheng)分(fen)已(yi)知(zhi)的有機物和無機物配(pei)制(zhi)而成(cheng)。成(cheng)分(fen)，重(zhong)復性(xing)強(qiang)。但(dan)營養局(ju)限，微(wei)生物生長緩慢(man)。適(shi)用(yong)於(yu)菌(jun)種分(fen)離、選(xuan)育(yu)、遺(yi)傳(chuan)分(fen)析(xi)及(ji)生物測(ce)定等(deng)。如(ru)培養放線(xian)菌(jun)的高氏(shi)培(pei)養(yang)基(ji)、培(pei)養(yang)黴(mei)菌(jun)的察氏(shi)培(pei)養(yang)基(ji)以及各(ge)種化能(neng)自養(yang)菌培養(yang)基(ji)等(deng)。

半(ban)合(he)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)：由(you)某(mou)些自然(ran)物質與(yu)少(shao)量(liang)已知成(cheng)分(fen)的化學(xue)物質配(pei)制(zhi)而成(cheng)。營養全面，能(neng)有效地滿(man)足微(wei)生物對(dui)營養的需求(qiu)。廣(guang)泛應(ying)用於(yu)微生物的培養(yang)。如(ru)培養細(xi)菌用的牛(niu)肉(rou)膏(gao)蛋(dan)白腖(dong)培(pei)養基(ji)，培(pei)養(yang)黴(mei)菌(jun)的土(tu)豆葡萄(tao)糖(tang)培養(yang)基(ji)，產業(ye)生產中(zhong)常用(yong)的玉(yu)米(mi)粉等(deng)自然(ran)物質加(jia)無機鹽配(pei)制(zhi)的各種發(fa)酵(jiao)培(pei)養(yang)基(ji)等(deng)。

自然(ran)培(pei)養(yang)基(ji)：由(you)化(hua)學成(cheng)分(fen)不(bu)清(qing)楚(chu)或(huo)不(bu)衡(heng)定(ding)的自然(ran)有(you)機物配(pei)制(zhi)而成(cheng)。成(cheng)分(fen)復雜，但(dan)營養豐富全面。常用(yong)於(yu)實驗(yan)研(yan)究和生產。如(ru)麥芽(ya)汁培養(yang)基(ji)、玉(yu)米(mi)粉培養基(ji)，以及生產中(zhong)使(shi)用的麩(fu)皮、鋸(ju)末等(deng)。

根據(ju)培(pei)養(yang)基(ji)的物理(li)性(xing)質，可(ke)分(fen)為液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)、固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)和半(ban)固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)。

液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)：用(yong)各(ge)種營養成(cheng)分(fen)加(jia)水(shui)配(pei)成(cheng)，或(huo)用(yong)自(zi)然(ran)物質的浸汁(麥芽(ya)汁、芽(ya)菜(cai)汁等(deng))制成(cheng)。組(zu)分(fen)均(jun)壹，適(shi)宜各類(lei)微生物的營養生長。廣(guang)泛應(ying)用於(yu)實驗研究及(ji)大規模產業(ye)生產中(zhong)，有(you)利於廣(guang)泛獲(huo)得(de)大量菌體或代謝(xie)產物。

固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)：在液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)中(zhong)加(jia)進(jin)凝固(gu)劑(ji)，或用(yong)麩(fu)皮等(deng)固(gu)體(ti)原料配(pei)制(zhi)。常用(yong)的凝固(gu)劑(ji)是瓊(qiong)脂(又(you)稱(cheng)瓊(qiong)膠(jiao)、洋(yang)菜(cai))，由(you)石(shi)花菜(cai)等(deng)海(hai)藻(zao)中(zhong)提(ti)取加(jia)工制成(cheng)。市(shi)售(shou)瓊(qiong)脂為條狀(zhuang)、片狀(zhuang)或(huo)粉(fen)末狀(zhuang)，主(zhu)要(yao)成(cheng)分(fen)為多(duo)聚(ju)半(ban)乳(ru)糖(tang)的硫酸酯(zhi)，盡大多數微生物不(bu)能(neng)將其(qi)分(fen)解(jie)，在培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)僅(jin)起支撐作(zuo)用(yong)。其(qi)熔(rong)點(dian)約(yue)98℃，凝固(gu)點(dian)42℃，1.5～2％的水(shui)溶(rong)液(ye)在壹般培(pei)養溫(wen)度下呈(cheng)凝膠狀(zhuang)態(tai)。瓊(qiong)脂固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)廣(guang)泛應(ying)用於(yu)微生物的分(fen)離培養、菌種鑒定和收躲(duo)。

半(ban)固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)：液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)中(zhong)加(jia)進(jin)0.2～0.5％瓊(qiong)脂制成(cheng)。用(yong)於(yu)觀察(cha)細(xi)菌的運(yun)動(dong)、菌種鑒定及測(ce)定噬菌體的效價等(deng)。

根據(ju)培(pei)養(yang)基(ji)的用途(tu)，可(ke)分(fen)為選(xuan)擇培(pei)養(yang)基(ji)、鑒(jian)別(bie)培(pei)養(yang)基(ji)、加(jia)富(fu)培(pei)養基(ji)、基(ji)本(ben)培養(yang)基(ji)等(deng)。

選(xuan)擇培(pei)養(yang)基(ji)：根據(ju)某(mou)壹類(lei)或某(mou)種微生物的特(te)殊(shu)營養要(yao)求(qiu)而(er)設(she)計(ji)的培養(yang)基(ji)，用(yong)於(yu)進(jin)步(bu)所需微(wei)生物的分(fen)離效率。如(ru)分(fen)離固(gu)氮微(wei)生物的無氮培(pei)養(yang)基(ji)、加(jia)進(jin)濾(lv)紙(zhi)條或纖(xian)維(wei)素粉(fen)為碳(tan)源(yuan)分(fen)離纖(xian)維(wei)分(fen)解(jie)菌的培養(yang)基(ji)。在培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)進(jin)某(mou)種化合(he)物，可(ke)有(you)效地分(fen)離出(chu)對(dui)這種化合(he)物有(you)抗(kang)性(xing)的微生物，例(li)如(ru)在放線(xian)菌(jun)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)進(jin)數(shu)滴10％的酚，可(ke)抑制(zhi)細(xi)菌和黴菌(jun)的生長；加(jia)進(jin)壹定量(liang)的青黴(mei)素、鏈黴(mei)素，可(ke)抑制(zhi)細(xi)菌生長等(deng)。

鑒別(bie)培(pei)養(yang)基(ji)：根據(ju)微(wei)生物的代謝(xie)特(te)點(dian)，在培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)進(jin)某(mou)種指示(shi)劑，通(tong)過顯(xian)色反應(ying)以鑒別(bie)不(bu)同(tong)的微生物。例(li)如(ru)檢(jian)查(zha)乳(ru)制(zhi)品(pin)和飲用(yong)水(shui)中(zhong)是(shi)否有腸(chang)道細(xi)菌汙染(ran)所(suo)用的伊紅-美(mei)藍培養(yang)基(ji)。當大腸(chang)桿菌(jun)等(deng)腸(chang)道細(xi)菌生長時，發(fa)酵(jiao)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的乳(ru)糖(tang)，使加(jia)進(jin)的伊紅-美(mei)藍變(bian)色，在菌(jun)落(luo)上沈(chen)積為紫(zi)玄(xuan)色，並呈(cheng)現(xian)金屬(shu)光澤(ze)。

培(pei)養基(ji)的制備方(fang)法(fa) 以下為常規方(fang)法(fa)，如(ru)配(pei)方(fang)中(zhong)有(you)特(te)殊(shu)規定或(huo)要(yao)求(qiu)，以配(pei)方(fang)為依(yi)據(ju)。

1.根據(ju)配(pei)方(fang)，計(ji)算各(ge)種營養成(cheng)分(fen)用(yong)量(liang)。壹般藥(yao)品(pin)可(ke)用(yong)普通藥(yao)物天(tian)平稱(cheng)量，用(yong)量少的藥(yao)品(pin)，可(ke)按比(bi)例(li)配(pei)成(cheng)高(gao)濃(nong)度溶(rong)液(ye)，再按所需量用(yong)移(yi)液(ye)管(guan)吸(xi)取。稱(cheng)好的藥(yao)品(pin)放進(jin)玻(bo)璃燒(shao)杯(bei)或搪瓷杯(bei)中(zhong)。

2.在另(ling)壹容器中(zhong)將(jiang)所需(xu)量(liang)的水(shui)(壹般可(ke)用(yong)自(zi)來水(shui)，有特(te)殊(shu)要(yao)求(qiu)時(shi)需(xu)用蒸(zheng)餾(liu)水(shui))加(jia)熱(re)，取全量的1/3左右(you)倒(dao)進(jin)放藥(yao)品(pin)的容器中(zhong)，用(yong)玻璃(li)棒(bang)攪拌(ban)，待藥(yao)品(pin)全溶(rong)後(hou)，再將(jiang)其(qi)余(yu)熱水(shui)全部(bu)倒(dao)進(jin)。

3.若(ruo)配(pei)制(zhi)固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)，則稱(cheng)取1.5～2％的瓊(qiong)脂放進(jin)已(yi)溶(rong)化(hua)的營養液(ye)中(zhong)，繼續(xu)加(jia)熱(re)至(zhi)瓊(qiong)脂全部(bu)溶(rong)解(jie)。加(jia)熱(re)中(zhong)隨(sui)時攪拌(ban)，防止溢(yi)出(chu)或(huo)糊底。燒(shao)糊的培養(yang)基(ji)營養物質破(po)壞，並產生有毒物質，不(bu)宜再用(yong)。

4.待溶(rong)化(hua)的培養(yang)基(ji)稍(shao)冷卻(que)後(hou)，按配(pei)方(fang)要(yao)求(qiu)調(tiao)整pH值(zhi)。先取10毫升(sheng)培(pei)養基(ji)裝(zhuang)進(jin)試(shi)管(guan)中(zhong)，用(yong)pH試(shi)紙測(ce)其(qi)自(zi)然(ran)pH，再用(yong)1％NaOH(或1％HCl)調(tiao)至(zhi)所(suo)需pH，根據(ju)用(yong)量(liang)計(ji)算，換(huan)用(yong)10％NaOH(或(huo)10％HCl)調(tiao)整所(suo)配(pei)全量培(pei)養(yang)基(ji)的pH。加(jia)堿(jian)(或酸(suan))溶(rong)液(ye)時(shi)，應(ying)邊滴加(jia)邊攪拌(ban)，至應加(jia)量(liang)將(jiang)近用完(wan)時，再次(ci)測(ce)試(shi)，zui後(hou)調(tiao)至要(yao)求(qiu)的pH值(zhi)。

5.配(pei)好(hao)的培養(yang)基(ji)，根據(ju)需(xu)要(yao)趁(chen)熱分(fen)裝(zhuang)至試(shi)管(guan)或錐形瓶(ping)中(zhong)。分(fen)裝(zhuang)需用(yong)漏(lou)鬥(dou)，以免瓊(qiong)脂粘(zhan)在管(guan)口或(huo)瓶(ping)口上。裝(zhuang)瓶(ping)量(liang)壹般為瓶(ping)容量的1/3～1/2；裝(zhuang)試(shi)管(guan)壹般為試(shi)管(guan)高度的1/5～1/4，以免滅菌時培(pei)養(yang)基(ji)上溢(yi)，粘(zhan)濕(shi)棉(mian)塞。

6.用預(yu)先制好的棉塞塞住管(guan)口或(huo)瓶(ping)口。棉(mian)塞既(ji)有(you)利於通(tong)氣(qi)，又(you)有濾(lv)菌(jun)作(zuo)用(yong)，故(gu)松(song)緊、大小應適(shi)當，以免使用時影(ying)響(xiang)操縱(zong)(如(ru)圖)。

zui後(hou)用(yong)牛(niu)皮紙(zhi)或報紙包住棉塞，紮(zha)緊在瓶(ping)頸(jing)或(huo)試(shi)管(guan)上方(fang)，以免滅菌時水(shui)蒸(zheng)汽(qi)沾(zhan)濕(shi)棉(mian)塞或脫(tuo)落(luo)。

7.滅(mie)菌(jun)後(hou)取出(chu)的固(gu)體(ti)培養(yang)基(ji)，根據(ju)需(xu)要(yao)可(ke)將(jiang)試(shi)管(guan)立即斜放，冷凝後(hou)即成(cheng)斜面(mian)培(pei)養基(ji)，用(yong)於(yu)菌(jun)種擴大培養及收躲(duo)；錐形瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)基(ji)，倒(dao)進(jin)無菌(jun)培養皿(min)中(zhong)，冷凝後(hou)即制成(cheng)平板(ban)培(pei)養(yang)基(ji)，可(ke)用(yong)於(yu)菌(jun)種的分(fen)離、鑒定等(deng)。液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)冷卻(que)後(hou)可(ke)直(zhi)接根據(ju)需(xu)要(yao)接進(jin)菌(jun)種。